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Thèse


Outils alternatifs à l'expérimentation animale pour l'évaluation de la toxicité des contaminants de l'environnement : lignées cellulaires et tests embryo-larvaires chez un poisson modèle, le Médaka Japonais, Oryzias latipes

Soutenue
le 11-04-2018

Par
Pauline PANNETIER

Directeur(s) de thèse
Jérôme Cachot / Bénédicte Mori,

Membres du jury
M. Jérôme CACHOT, Université Bordeaux, Directeur de thèse
Mme Bénédicte MORIN, Université Bordeaux, Directeur de thèse
Mme Catherine MOUNEYRAC, Université Catholique de l'Ouest, Rapporteur
M. Stéphane BETOULLE, Univ. de Reims Champagne-Ardennes, Rapporteur
Mme Magalie BAUDRIMONT-LARUE, Université Bordeaux, Examinateur
Mme Sylvie BONY, INRA, Examinateur
M. Xavier COUSIN, INRA/IFREMER, Invité
Mme Morgane DANION, ANSES, Invité

Résumé
Les poissons sont parmi les modèles aquatiques les plus utilisés pour l'évaluation des dangers des substances chimiques avant leur mise sur le marché européen (REACh (Registration, Evaluation, Autorisation and Restriction of CHemicals)). Actuellement, cette réglementation ainsi que la directive européenne sur la protection des animaux utilisés à des fins scientifiques (2010/63/UE) promeuvent la mise en place de méthodes alternatives en expérimentation animale. Ces méthodes ont pour but de remplacer les modèles animaux chaque fois que cela est possible, de réduire le nombre d'animaux utilisés en expérimentation et d'optimiser la méthodologie appliquée aux animaux. Cette thèse vise à comparer la sensibilité de deux de ces outils alternatifs, les lignées cellulaires et les tests embryolarvaires poissons, en utilisant des toxiques modèles puis mettre en ?uvre ces outils pour évaluer la toxicité de mélanges environnementaux de polluants : microplastiques et hydrocarbures (pétrole Arabian Light). Les composés modèles (BaP, Cd, MMS, PCB126) ont permis de valider trois biomarqueurs : la production d'espèces réactives de l'oxygène sur lignées cellulaires de poissons, le test micronoyaux par cytométrie de flux et le challenge infectieux sur larves de médaka. Ces biomarqueurs associés à des analyses chimiques, biochimiques et physiologiques ont permis d'évaluer la toxicité de mélanges environnementaux d'hydrocarbures (extrait aqueux de pétrole Arabian = WAF) et de microplastiques. Les WAF présentent une toxicité sur les lignées cellulaires de poissons (induction de l'activité EROD, génotoxicité) ainsi que sur embryons et larves de médaka (comportement, biométrie, EROD, génotoxicité). Les poissons comme les cellules sont particulièrement sensibles au WAF de l'Arabian Light. La contamination aux microplastiques (MP) environnementaux a révélé une toxicité des contaminants associés au MPs sur les lignées cellulaires et les larves de poisson. L'ingestion de particules de plastiques par les larves a induit des effets létaux et sublétaux (biométrie, comportement et EROD). L'ingestion des particules plastiques par les larves a été confirmée par microscopie biphotonique. Cette étude a permis d'évaluer la sensibilité et la complémentarité de ces outils in vitro pour l'évaluation des dangers et des risques associés aux substances chimiques.

Mots-clé
tests embryo-larvaires, lignées cellulaires, médaka japonais, microplastiques, hydrocarbures

Mémoire en ligne
http://www.theses.fr/2018BORD0050/document
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